細(xì)菌涂片及細(xì)菌染色是微生物學(xué)的基本技術(shù)，也是觀察細(xì)菌更簡單且行之有效的方法，是微生物檢測人員常用技能之一。通常情況下，由于細(xì)菌個體較小，較透明或半透明，如未經(jīng)染色往往不以觀察識別。因此借助于染色法可以使細(xì)菌著色，與視野背景形成鮮明對比，從而易于在顯微鏡下進(jìn)行觀察。

微生物檢測常見的細(xì)菌染色方法包括簡單染色、負(fù)染色、革蘭氏染色、芽孢染色法、鞭毛染色、莢膜染色、死活染色。制備細(xì)菌染色片一般要經(jīng)過涂片、固定、染色、水洗、干燥等步驟，然后用微儀顯微鏡觀察。上期介紹了前面2種方法，下面顯微鏡廠家給您介紹第三第四種方法。

3. 革蘭氏染色

革蘭氏染色是微生物檢測細(xì)菌學(xué)中廣泛使用的一種鑒別染色法。細(xì)菌先經(jīng)堿性染料結(jié)晶紫染色，而后經(jīng)碘液進(jìn)行媒染，之后用酒精脫色，在一定條件下有的細(xì)菌媒染后的顏色不會脫去，有的可以被脫去，前者叫做革蘭氏陽性菌，后者為革蘭氏陰性菌。為方便進(jìn)一步觀察，脫色后再用堿性蕃紅進(jìn)行復(fù)染，陽性菌仍為紫色，陰性菌染成紅色，這就是革蘭氏染色的原理。其步驟包括初染、媒染、脫色、復(fù)染四個步驟，主要步驟如圖所示：

4. 芽孢染色法

部分細(xì)菌能產(chǎn)生內(nèi)孢子，這些孢子能抵制細(xì)菌染色液的進(jìn)入，在微生物檢測革蘭氏染色法涂片染色時，革蘭氏陽性菌的芽孢呈現(xiàn)無色。雖然芽孢在革蘭氏染色片中可以看到，但在不易清晰觀察時，可用特殊的芽孢染色法，使芽孢與菌體呈現(xiàn)不同顏色，便于觀察。主要的芽孢染色法有孔雀綠染色法和石碳酸復(fù)紅染色法。

孔雀綠染色法的具體步驟：首先將生有芽孢的斜面菌苔按革蘭氏染色法涂片后，用飽和孔雀綠水溶液染色10min，然后用自來水沖洗，沖洗完后用0.5%蕃紅液復(fù)染30s，用水洗，吸干，即可鏡檢，鏡檢時芽孢呈綠色，菌體和芽孢囊呈微紅色。

石碳酸蕃紅染色法具體步驟：首先按常規(guī)涂片，然后滴加石碳酸復(fù)紅于涂片上，并于玻片下緩緩加熱，使染液冒蒸汽但不沸騰，并繼續(xù)滴加染液，不使涂片上染液蒸干，這樣保持5min。帶涂片冷卻后，傾去染液，用酸性乙醇脫色指無紅色染劑洗脫為止，接著徹底水洗，洗后用呂氏美藍(lán)復(fù)染2-3min，水洗吸干后即可進(jìn)行鏡檢，鏡檢時菌體計孢囊呈藍(lán)色，芽孢呈紅色。

上面就是顯微鏡廠家介紹的關(guān)于微生物檢測常見細(xì)菌染色方法二。

文章內(nèi)容來源：環(huán)凱微生物