激光共聚焦顯微鏡對于樣品有一系列特殊的要求,這些要求旨在確保樣品能夠在顯微鏡下得到清晰、準確的觀測結(jié)果。以下是對這些要求的詳細歸納:
一、生物樣品要求
熒光表達正常:
樣品應(yīng)在熒光顯微鏡下預(yù)先觀察,以確定熒光表達是否正常,從而判斷是否有必要使用激光共聚焦顯微鏡進行進一步觀察。
蓋玻片厚度:
蓋玻片的厚度要求通常小于或等于0.17mm,以確保光線的穿透性和圖像的清晰度。
明確激發(fā)波長和發(fā)射波長:
需要明確樣品的激發(fā)波長和發(fā)射波長,以便選擇合適的激光光源和濾光片進行觀測。
掃描區(qū)域和參數(shù):
如果需要進行三維重構(gòu),需要明確掃描區(qū)域的大小、位置和Z步進等參數(shù),這些參數(shù)會影響測試時間和圖像的分辨率。
樣品貼壁:
樣品B須貼壁良好,不能懸浮起來。對于細胞樣品,需要在載玻片上固定好后送樣測試。
抗熒光淬滅劑:
在進行顯微成像時,樣品需要加入抗熒光淬滅劑,以防止熒光信號的減弱或消失。
二、材料樣品要求
樣品制備:
材料樣品需要提前制備好,以確保其表面平整、無雜質(zhì),并適合激光共聚焦顯微鏡的觀察。
樣品尺寸:
樣品的尺寸沒有具體要求,但拍出來的圖像面積應(yīng)在一定范圍內(nèi)(如1.11x1.8mm到5x5mm),并且顏色可調(diào)。
樣品平整性:
樣品B須平整,以確保光線的均勻照射和圖像的清晰度。不平整的樣品可能會導致圖像模糊或變形。
三、通用要求
熒光探針標記:
樣品通常需要經(jīng)過熒光探針標記,以便在激光共聚焦顯微鏡下觀察到特定的結(jié)構(gòu)或成分。
樣品固定:
無論是生物樣品還是材料樣品,都需要進行適當?shù)墓潭ㄌ幚?,以確保樣品在觀察過程中不會移動或變形。
載玻片和蓋玻片質(zhì)量:
載玻片和蓋玻片應(yīng)選擇質(zhì)量好、光潔、無雜質(zhì)的材料。對于重要的實驗,需要提前檢查載玻片和蓋玻片的光學特性,確保無熒光干擾。
封片劑選擇:
封片劑通常選擇甘油:PBS混合液(如9:1的比例),以確保樣品的穩(wěn)定性和清晰度。
綜上所述,激光共聚焦顯微鏡對于樣品的要求較為嚴格,需要確保樣品的熒光表達正常、尺寸合適、平整無雜質(zhì),并經(jīng)過適當?shù)墓潭ê蜆擞浱幚怼_@些要求旨在提高觀測結(jié)果的準確性和可靠性。