激光共聚焦顯微鏡對(duì)樣品的要求相對(duì)嚴(yán)格，以確保測(cè)試結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。以下是對(duì)樣品要求的具體介紹：

一、生物樣品

熒光表達(dá)檢查：S先，在熒光顯微鏡下觀察熒光表達(dá)是否正常，以確定是否有必要使用激光共聚焦顯微鏡。

蓋玻片厚度：蓋玻片的厚度應(yīng)小于或等于0.17mm，以確保測(cè)試過(guò)程中的光學(xué)性能。

激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)：需要明確樣品的激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)，以便在測(cè)試過(guò)程中進(jìn)行正確的設(shè)置。

掃描參數(shù)：對(duì)于需要重構(gòu)的樣品，需要明確掃描區(qū)域的大小、位置和Z步進(jìn)等參數(shù)，這些參數(shù)會(huì)直接影響測(cè)試時(shí)間。

樣品固定：樣品B須貼壁良好，不能懸浮，需要在載玻片上固定好后進(jìn)行送樣測(cè)試。同時(shí)，樣品需要加抗熒光淬滅劑以防止熒光信號(hào)在測(cè)試過(guò)程中減弱或消失。

細(xì)胞樣品：對(duì)于細(xì)胞樣品，如貼壁細(xì)胞或懸浮細(xì)胞，在染色結(jié)束后需使用抗熒光淬滅劑或50%甘油（甘油和PBS 1:1）進(jìn)行封片。此外，對(duì)于貼壁不牢的細(xì)胞或需要特殊處理的細(xì)胞，可能還需要使用特定的包被劑如poly-L-Lysine、Fibronectin、Laminin等，或使用玻璃底的共聚焦專用培養(yǎng)皿進(jìn)行檢測(cè)。

組織樣品：組織樣品無(wú)論是石蠟切片還是冰凍切片，都需要單層且能很好地貼附在樣品池中。冰凍切片的厚度一般在8-10μm之間，而石蠟切片的厚度則在4-5μm之間，這樣的厚度可以獲得較好的成像效果。此外，用于免疫熒光抗體標(biāo)記組織切片的載玻片還需經(jīng)過(guò)明膠、蛋白膠、多聚賴氨酸、硅烷等處理，以粘貼組織切片并防止其在免疫反應(yīng)過(guò)程中脫落。

二、材料樣品

樣品制備：主要測(cè)試偏材料的樣品，需要提前制備好并確保樣品平整。

樣品尺寸：樣品的尺寸沒(méi)有具體要求，但拍出來(lái)的Z大面積應(yīng)在一定范圍內(nèi)（如1.11x1.8mm到5x5mm），顏色也可根據(jù)需要進(jìn)行調(diào)整。

三、其他注意事項(xiàng)

樣品標(biāo)記：樣品需經(jīng)熒光探劑標(biāo)記（可單標(biāo)、雙標(biāo)、三標(biāo)），以便在測(cè)試過(guò)程中進(jìn)行識(shí)別和定位。

固定劑和封片劑：針對(duì)不同抗原結(jié)構(gòu)特點(diǎn)選用合適的固定劑，如有機(jī)溶劑固定劑（丙酮、甲醇）和交聯(lián)劑固定劑（多聚甲醛）。封片劑可防止樣品熒光褪色、干燥及蓋玻片脫落，如臨時(shí)封片可封于甘油+PBS（1:1）中，Y久封片可采用Mowiol等封固劑。

儀器使用和管理：在使用激光共聚焦顯微鏡時(shí)，應(yīng)記錄關(guān)機(jī)時(shí)間、儀器狀況等信息，并嚴(yán)格按照操作規(guī)程進(jìn)行操作。

綜上所述，激光共聚焦顯微鏡對(duì)樣品的要求涉及多個(gè)方面，包括樣品的熒光表達(dá)、蓋玻片厚度、激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)、掃描參數(shù)、樣品固定、細(xì)胞和組織樣品的特殊處理以及樣品標(biāo)記和固定劑等。這些要求共同確保了測(cè)試結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。