激光共聚焦顯微鏡在操作時需要注意多個方面,以確保實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和安全性。以下是一些關(guān)鍵的注意點(diǎn):
一、開機(jī)與關(guān)機(jī)流程
開機(jī)流程:
打開外部電源。
打開顯微鏡電源開關(guān),等待顯微鏡初始化完畢。
打開激光器電源開關(guān)。
打開電腦,進(jìn)入操作系統(tǒng)。
雙擊桌面上的相關(guān)軟件圖標(biāo),啟動軟件。
打開激光器的啟動鑰匙,使系統(tǒng)處于可工作狀態(tài)。
關(guān)機(jī)流程:
保存所有有用的設(shè)置和數(shù)據(jù)。
關(guān)閉激光器控制鑰匙,使激光器停止工作。
退出操作系統(tǒng)和相關(guān)軟件。
關(guān)閉電腦。
稍后關(guān)閉激光器電源。
關(guān)閉外部電源供應(yīng)開關(guān)。
二、操作過程中的注意事項(xiàng)
嚴(yán)格按照使用規(guī)則操作:不要隨意更改操作程序,尤其是激光共聚焦顯微鏡中的激光發(fā)射管,它具有有限的使用壽命并且價格昂貴。在開關(guān)的啟動順序和掃描過程中要特別注意保護(hù)激光管。
安全防護(hù):
小心不要接觸中等功率和高功率的激光輻射,避免直視激光束。
不要在共焦顯微鏡附近存放或使用易燃或易爆物質(zhì),液體或氣體。布或紙等易燃材料不應(yīng)放在光路中。
激光穩(wěn)定時間:啟動或更改激光功率后,激光光源需要大約20分鐘才能穩(wěn)定下來。
圖像存儲與處理:
掃描的圖像存儲在計(jì)算機(jī)中以供進(jìn)一步處理。由于計(jì)算機(jī)的硬盤空間有限,應(yīng)及時將重要數(shù)據(jù)存儲在外部存儲設(shè)備(如U盤、移動硬盤等)上,但要注意避免病毒感染。
使用前,須嚴(yán)格檢查存儲設(shè)備是否攜帶病毒。
儀器預(yù)熱:在開始實(shí)驗(yàn)之前,讓顯微鏡預(yù)熱30分鐘到一個小時,以確保其達(dá)到穩(wěn)定的工作狀態(tài)。
選擇合適的參數(shù):
根據(jù)熒光探針的激發(fā)和發(fā)射波長選擇合適的激光、激光功率、光譜濾光片和發(fā)射濾光片。
確定掃描方法(點(diǎn)、線、面、3D掃描)和掃描密度(分辨率)。分辨率越高,掃描速度越慢,圖像信噪比越好,但可能會增加光漂白的風(fēng)險(xiǎn)。
選擇合適的物鏡倍數(shù)和電子放大倍率,以及針孔尺寸,調(diào)節(jié)激光管電壓、光電倍增管功率等參數(shù)以達(dá)到Z佳狀態(tài)。
環(huán)境控制:
保持室內(nèi)恒溫、清潔、干燥。室溫建議控制在22-25攝氏度,相對濕度80%以下。
至少在溫差大的季節(jié)請24小時控制環(huán)境參數(shù)。
日常保養(yǎng):
建議專人管理、操作儀器。
使用顯微鏡油鏡后請用專用鏡頭水(如無水乙醇和乙醚混合物)清潔鏡頭前部。
可用擰干的濕抹布清潔外殼。
定期與儀器供應(yīng)商的專業(yè)工程師聯(lián)系,進(jìn)行儀器的校準(zhǔn)和維護(hù)。
避免頻繁開關(guān)激光器:短時間的停頓工作時,無需關(guān)閉系統(tǒng)。只是做一些分析圖片等工作時,無需打開激光器控制鑰匙,以減少激光器的損耗。但是頻繁開關(guān)激光器會適得其反。
三、其他注意事項(xiàng)
記錄實(shí)驗(yàn)過程中的所有相關(guān)數(shù)據(jù),如激光功率、曝光時間、掃描速度等,這些數(shù)據(jù)對于后續(xù)的數(shù)據(jù)分析和解釋非常重要。
使用合適的對照樣本,以消除誤差和偏差。
以上內(nèi)容基于多個權(quán)威來源的信息整理,旨在提供激光共聚焦顯微鏡操作時的全面指導(dǎo)。在實(shí)際操作中,請務(wù)必遵循儀器制造商提供的具體操作手冊和安全指南。