激光共聚焦顯微鏡實(shí)現(xiàn)對樣品某一層的熒光信息進(jìn)行掃描的過程可以歸納如下:
光源與照明:
激光共聚焦顯微鏡采用激光束作為光源。
激光束經(jīng)照明針孔后形成點(diǎn)光源,并通過分光鏡反射至物鏡。
聚焦與掃描:
激光束聚焦于樣品上,對標(biāo)本焦平面進(jìn)行逐點(diǎn)、逐行、逐面的快速掃描。
通過控制調(diào)焦深度,可以精確地定位到樣品的某一層進(jìn)行掃描。
熒光收集與成像:
組織樣品中如果存在可被激發(fā)的熒光物質(zhì),這些物質(zhì)在受到激光照射后會(huì)發(fā)出熒光。
發(fā)出的熒光沿原入射光路反向回到分光鏡,并通過探測針孔進(jìn)行聚焦。
聚焦后的熒光由光電倍增管(PMT)或冷電耦器件(CCD)接收,并轉(zhuǎn)化為電信號。
信號處理與顯示:
接收到的電信號被傳送到計(jì)算機(jī)進(jìn)行處理和分析。
計(jì)算機(jī)通過圖像分析和模擬技術(shù),將掃描到的熒光信息轉(zhuǎn)化為可視的圖像。
用戶可以在計(jì)算機(jī)屏幕上觀察到所觀察表面的立體結(jié)構(gòu),并可以進(jìn)一步對圖像進(jìn)行處理和分析。
特點(diǎn)與優(yōu)勢:
激光共聚焦顯微鏡通過兩次聚焦(共聚焦)技術(shù),能夠精確控制掃描深度,從而獲得樣品不同深度層次的圖像。
與傳統(tǒng)熒光顯微鏡相比,激光共聚焦顯微鏡具有更高的對比度、分辨率和靈敏度,能夠?qū)崿F(xiàn)多重?zé)晒獾耐瑫r(shí)觀察和形成清晰的三維圖像。
綜上所述,激光共聚焦顯微鏡通過激光束的聚焦和掃描,結(jié)合熒光收集、信號處理和顯示等技術(shù),實(shí)現(xiàn)對樣品某一層的熒光信息的精確掃描和成像。